_

۸.۸۰۰E-004

_

۰.۱۵

Residual

_

۵۱۵.۳

_

۷.۰۰

_

۲۲۹۳.۳

Total

در نهایت در میان پارامترهای مختلف، پارامتری که بیشترین Sum of squar را داشته باشد به عنوان اثرگذارترین پارامتر و برعکس انتخاب می‌شود.
۴-۲- اندازه گیری محتوای ترکیبات فنولی عصاره گیاه گلرنگ
جهت تعیین محتوای ترکیبات فنولیک موجود در عصاره گیاه گلرنگ ابتدا می بایست نمودار استاندارد آن را بر حسب اسید گالیک ترسیم نماییم(شکل ۴-۱).
Gallic acid standard curve
شکل۴-۱- نمودار استاندارد تست فولین بر حسب اسید گالیک
۴-۲-۱- اثر سه فاکتور دما، زمان و pH بر روی استخراج ترکیبات فنولیک
با توجه به شکل (۴-۲) همان طور که مشاهده می شود با افزایش دما و زمان مقدار استخراج ترکیبات فنولی افزایش می یابد همچنین در دمای بالای ۴۰ درجه مقدار استخراج کم شده است.

شکل ۴-۲- اثرمتقابل دو متغیر دما و زمان بر روی میزان استخراج ترکیبات فنولیک
اثر متقابل دو فاکتور زمان و Ph در شکل (۴-۳) نشان داده شده است. همان طور که در شکل مشخص است افزایش pH تا حدود ۷ باعث افزایش در مقدار استخراج ترکیبات فنولی شده است اما در pH های بالاتر کاهش در مقدار استخراج ترکیبات فنولی مشاهده می شود. افزایش زمان نیز باعث افزایش در مقدار ترکیبات فنولیک شده است.

شکل ۴-۳- اثر متقابل دو متغیر زمان و pH بر روی میزان استخراج ترکیبات فنولیک
همان طور که در شکل (۴-۴) مشاهده میشود در ارتباط با اثر متقابل دما و pH روند تغییرات اینگونه بوده است که تا دمای ۳۹ درجه و افزایش pH تا حدود ۳/۷ افزایش در مقدار استخراج مشاهده شده است اما پس از آن با افزایش pH مقدار استخراج ترکیبات فنولی کاهش یافت.

شکل ۴-۴- اثر متقابل دو متغیر دما و pH بر روی میزان استخراج ترکیبات فنولیک
با توجه به نمودارها می توان بیان کرد که دما و زمان به طور معنی داری بر میزان استخراج ترکیبات فنولیک موثر است به طوری که با افزایش دما و زمان، روند افزایشی در میزان استخراج ترکیبات فنولیک مشاهده شده است. افزایش دما سبب افزایش ضریب نفوذ حلال و افزایش زمان نیز مدت زمان انتقال جرم را افزایش می‌دهد با توجه به اینکه مقدار نسبت نمونه به حلال در این طرح (نسبت ۱:۳۵) ثابت در نظر گرفته شد، دلیل کاهش مقدار استخراج ترکیبات فنولی با توجه به نمودار Surface به دلیل اشباعیت حلال در دما و زمان های بالاتر و همچنین به دلیل از هم پاشیدگی دمایی ترکیبات فنولی، در دماهای بالا می باشد.
هررا و همکاران (۲۰۰۵) و همچنین پینلو و همکاران (۲۰۰۵) بیان داشتند که افزایش دما و زمان استخراج به طور معنی‌داری بر روی میزان استخراج ترکیبات فنولیک به ترتیب بر روی توت آسیاب شده و تفاله انگور موثر است(۳۶و۵۸).
کاکاکه و همکاران گزارش کردند که افزایش دما سبب افزایش استخراج آنتوسیانین از انگور سیاه شده است. این محققان دلیل این امر را اثر دما روی افزایش حلالیت و افزایش ضریب نفود می‌دانستند. این محققان در ادامه اعلام کردند در دماهای بالاتر از ۴۵ درجه سانتیگراد شیب تندی در کاهش میزان آنتوسیانین مشاهده شده است و این به دلیل حساسیت آنتوسیانین به دماهای بالا می‌باشد(۲۰).
نتایج حاصل در مورد زمان استخراج با نتایج سوئلی و همکاران مطابقت دارد. سوئلی بر اساس نمودارهایی که در آن اثر متقابل زمان را با سایر فاکتورها (pH، دما و نسبت نمونه به حلال) بررسی کرد، مشخص نمود که با افزایش مدت زمان استخراج (۲۰ تا ۶۰ دقیقه) تفاوت معنی‌داری در استخراج ترکیبات فنولیک دیده نمی‌شود. سوئلی این گونه بیان کرد که وقتی که حلال با ترکیبات استخراج شده اشباع می‌شود شیب غلظت صفر شده و اثر حلال متوقف می‌شود (۶۴).
یاکین و همکاران (۲۰۰۹) بیان کردند که با افزایش دما و زمان استخراج (تا حدود ۴۰ درجه سانتیگراد) افزایش در میزان استخراج ترکیباب از پوست نوعی از مرکبات (citrus) فنولیک مشاهده شد اما یک روند کاهشی در مقدار استخراج ترکیبات فنولیک در زمان‌ها و دماهای بالاتر (دمای بالای ۴۰ درجه سانتیگراد) مشاهده شد این محققان دلیل این امر را تجزیه حرارتی یا واکنش‌های پلی مریزاسیون ترکیبات فنولیک با خودشان بیان نمودند (۷۱).
محققانی دیگر از جمله پینلو (۲۰۰۵) و ییلماز (۲۰۰۴) و مانسی (۲۰۰۱) در کارهای تحقیقاتی خود که روند استخراج ترکیبات فنولیک را بررسی می‌کردند بیان داشتند که در دماهای بالا، کاهش در میزان استخراج ترکیبات فنولیک مشاهده شده است. همه این محققان دلیل این امر را واکنش های پلی‌مریزاسیون ترکیبات فنولیک با خودشان بیان نمودند (۴۵و۵۵و۸۵). با توجه به اینکه pH حلال مورد نظر، (متانول ۸۰ درصد) برابر با ۵.۳ در شرایط آزمایشگاه (۲۱درجه سانتیگراد) می‌باشد و با اضافه کردن ۱ گرم از پودر نمونه گیاهی، بعد از همزدن مخلوط حاصل، در حدود ۶ ثابت می شود بنابراین pH طبیعی نمونه گیاهی ۶ می‌باشد و روند کاهشی مقدار استخراج ترکیبات فنولی بعد از ۷pH= در نمودارهای Surface مربوط به اثر متقابل زمان- pH و دما- pH در ارتباط با دور شدن pH از ph طبیعی گیاه می‌باشد.